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        間質干細胞的表面抗原和培養原理

        間質干細胞的表面抗原

        通過流式細胞儀分析,間充質干細胞特異性表面抗原有:SH2、SH3、 CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124。


        BMSC:是骨髓中除HSC 以外的非造血性干細胞,骨髓中絕大多數是HSC,BMSC 只占骨髓有核細胞的0.001%~0.01% 。因此鑒定BMSC 的方法是在骨髓的干細胞中排除HSC——BMSC:CD45-、CD34-、CD29+、 CD14+/ HSC:CD34+。

        間質干細胞的培養原理概述


        間質干細胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一群中胚層來源的具有自我更新和多向分化潛能的多能干細胞,在適宜的培養條件下可分化成多種組織細胞,包括成骨細胞、軟骨細胞、肌肉細胞、脂肪細胞等。


        間質干細胞最早是從骨髓中分離得到的,正常情況下,它在骨髓中的比例非常低,僅占單核細胞的1/105 ~1/104 。骨髓中單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞,其體積、形態和密度與其他細胞不同,紅細胞和多核白細胞密度較大,為1.090 g/ml左右,而淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090 g/ml,血小板為1.030~1.035 g/ml。為此利用一種密度介于1.075~1.092 g/ml之間而近于等滲的溶液(分層液)進行密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。常用的分層液有Ficoll和Percoll兩種。


        在骨髓的原代培養物中,除了貼壁生長的成纖維細胞樣的間質干細胞外,還混雜著一些巨噬細胞、單核細胞、造血細胞及紅細胞等,要得到較均一的間質干細胞,必須除去其他細胞。根據其他細胞的特性,可采用不同的方式排除它們。對于紅細胞,因其不貼壁,可通過換液除去。對于貼壁的單核巨噬細胞,可根據其黏附能力的不同,通過調整Trypsin/EDTA 的消化時間,保證間質干細胞在短暫的作用時間內與塑料培養瓶壁分離,而巨噬細胞、單核細胞、造血細胞等仍貼附于培養瓶壁,從而使間質干細胞與其他的貼壁細胞得到分離。


        在傳代培養中,接種密度是影響體外培養間質干細胞增殖潛能的重要因素。低密度接種時,間質干細胞的增殖能力明顯提高,而誘導細胞分化時則需要較高的細胞密度,這可能與分化時細胞與細胞間的相互作用有關。而在培養過程中,若細胞過度融合會促進其分化趨向,故要保持干細胞未分化狀態,要及時傳代。


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        上海傳秋生物科技有限公司
        Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
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