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        抗體的儲存條件

        抗體由于性質和所使用的儲存條件不同,其存儲的“保質期”可能從幾周到幾年不等。盡管每個抗體存儲的最佳條件是獨特的,但我們還是能夠總結出一些關于抗體存儲建議和一般準則。

        抗體的儲存時間取決于抗體固有的性質和儲存條件??贵w(尤其是酶)必須存放在適當的溫度和pH值范圍。為了維持蛋白質的活性、防止其聚集,經常保存在一定濃度的甘油,蔗糖,或類似的物質里面。

        1、低溫儲存對于抗體的保存至關重要

        一般來說,抗體最好存放在≤4℃的清潔,滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會由于微生物的生長導致抗體退化和/或失活。抗體儲存液放在4℃環境中1天或者幾周內其活性不會受到明顯影響。另外,抗體中可以加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲存于-20℃。通常我們為了避免反復凍融,可以分裝抗體。我還可以加入抗微生物藥物(如疊氮化鈉或硫柳汞)以避免微生物的生長。

        帶有標記的抗體最好存放在終濃度為50%的甘油或乙二醇里并防止在-20℃的環境中。盡管有些酶結合物可以不加抗凍劑儲存在-20℃,但是這些抗體必須分裝使用以防止反復凍融,尤其是堿性磷酸酶偶聯對凍融特別敏感。帶有標記的抗體通??梢栽诟视突蛞叶贾杏?20℃保存1-2年。但是,在冷凍保護劑的污染物可能會影響酶的活性。

        一些研究人員發現多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而,一旦抗體被純化后,儲存在50%的甘油中于-20℃保存,即使沒有凍融,其活性的損失也可以觀察到,盡管其進程仍然非常緩慢。但許多研究者需要將這些多克隆抗體注射到動物體內,為了避免內毒素的干擾,一般都不加入甘油。而且大量研究表明:即使沒有甘油,只要你不反復凍融,抗體也可以存儲在-20℃幾年甚至幾十年。另一個重要的事情是,該抗體濃度應高于1毫克/毫升,因為稀的抗體容易失去活性而且容易造成物理吸附導致的損失。而單克隆抗體可以用兩種方式保存:第一,保存在50%的甘油存放于-20℃;第二,也是比較好的方式,將其保存在飽和硫酸銨于4℃或-20℃(4℃更好)保存。多年未見有失活、細菌滋生以及氧化。有些研究人員為了長期儲存抗體,將抗體分裝后放置于液氮中。然而抗體存儲在-20℃或-80℃更常見,因為凍融降低蛋白質的穩定性,所以我們一定要分裝抗體使用,這樣就可以避免抗體的反復凍融。而凍干法(冷凍干燥,干燥或從冰凍狀態)為一些冰凍以后不穩定抗體提供了一種替代的保存方法。在大多數情況下,凍干的抗體最好是存放在-20℃。雖然冷凍干燥有許多優點,它需要昂貴的設備和勞動力。

        2、向抗體儲存液中加入抗氧化劑是防止抗體因氧化失效的關鍵步驟

        氧化反應是某些酶,尤其是巰基酶的共同問題。為了防止氧化反應對抗體的破壞,我們可以向抗體中加入一些還原劑(如二硫蘇糖醇(DTT)或2 - 巰基乙醇(2-ME))。實驗證明:越高的pH環境和溫度,這些有酶活性的抗體的保存時間越短。此外,加入0.1mM的銅離子其氧化率增加,而加入金屬螯合劑EDTA增加其保存的有效期。

        3、蛋白質穩定劑和抗生素對于抗體的穩定儲存也發揮著重要作用

        蛋白質穩定試劑可以延長大多數蛋白質在4℃或-20℃的保質期。而25-50%的甘油或乙二醇等防凍劑有助于穩定抗體,防止在-20℃環境中形成冰晶,避免其破壞蛋白質的結構。蛋白酶抑制劑的加入可以防止抗體發生水解反應導致其失活。而抗微生物藥物,如最終濃度在0.02-0.05%(W / V)的疊氮化鈉(NaN3的)或終濃度為0.01%(W / V)的硫柳汞可以抑制微生物的生長。

        4、抗體的儲存濃度對于抗體保存的有效期也有顯著影響

        抗體濃度過低(<1毫克/毫升)更容易發生抗體的失活以及增加物理吸附造成的損失。因此,我們都要盡量的保持抗體(例如,大于1毫克/毫升)在儲存期間的濃度。通常的做法是添加“載體”蛋白質,如純化牛血清白蛋白(BSA)以防止這種降解和損失。


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        上海傳秋生物科技有限公司
        Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
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