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        細胞凍存有哪些注意事項?

        很多人覺得細胞凍存很簡單,但是有些注意事項操作不好會影響或是損壞細胞的質量哦,今天就來給大家總結下,凍存細胞的相關注意事項。


        注意事項:


        1.欲冷凍保存之細胞應在生長良好(logphase)且存活率高之狀態,約為80~90%致密度。冷凍檢則細胞是否仍保有其特有性質,例如hybridoma應在冷凍保存至二日測試是否有抗體之產生。


        2.細胞在液氮中可長期凍存無限時間,而不會影響細胞活力;在-70度可保存數月。


        3.注意冷凍保護劑之品質。DISO應為試劑等,無菌且無色以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品,如Sigma D-2650),以5~ 10mI小體積分裝,4C避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑等,以高壓蒸汽滅菌后避光保存。


        在開啟后年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,可避免DMSO直接加入時釋放的熱里對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高參,可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化,可換用10%甘油凍存。


        4.冷凍保存Z細胞濃度:


        ①normal human fibroblast : 1~ 3x 10'ce1ls/ml


        ②hybridoma: 1~3x 10*cells/m1,細胞濃度不要太高,某些hybridoma會因冷凍濃度太高而在解凍24小時后死去。


        ③adherent tumor lines:5~ 7x10,依細胞種類而異。Adenocarcinoma解凍后須較高之濃度,而HeLa只需1~3x 10'cells/ml


        ④other suspensions:5~ 10X 10'cells/ml,human lymphocyte 須至少5X 10'cells/ml。



        5.凍存可用10%~90%的血清,般高濃度血清有助于維護細胞活力,此處介紹20%終濃度有利于細胞懸浮而少沉積(4 度時),復蘇存活率在80%~90%以上,對原代培養細胞,以90%血清凍存更為有效。

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        上海傳秋生物科技有限公司
        Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
               公司主要依托復旦大學、同濟大學等上海地區多家著名高校,擁有一支富有經驗的開發團隊,專業從事細胞及細胞...
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